准备工作

1.仪器设备

CO2培养箱、双人单面超净台、倒置显微镜、台式冷冻离心机、水浴锅、水浴摇床，医用冰箱、-80°冰箱、移液器（一套）、眼科剪、眼科镊。

2.试剂耗材

小肠类器官培养基，小肠类器官消化液，小肠组织保存液，小肠类器官缓冲液，硫酸庆大霉素，双抗，组织固定液，基质胶，60mm细胞培养皿，μm滤筛，15ml离心管，1.5mlEP管若干，4度冰盒，眼科剪刀，眼科镊。

操作流程

1.类器官操作流程之——样本准备

（1）将组织放入含有器官保存液的取样瓶中，4℃从医院/实验室取回。

（2）将取样瓶消毒，组织取出放入培养皿样本拍照，并登记，大小，颜色，软硬程度，组织类型等信息。

2.类器官操作流程之——清洗-剪碎

添加含有双抗、庆大霉素的类器官缓冲液浸泡，用眼科镊刮去肠道粘膜，肠绒毛等。在培养皿中用类器官缓冲液清洗三次（每次更换培养皿）后剪碎，剪成大约1mm3的组织块。静置2次。

3.类器官操作流程之——消化-过滤

（1）用组织消化液在37℃进行消化10-15min（消化过程中随时观察消化情况）。

（2）类器官缓冲液终止消化，用枪头轻柔吹打可以看到液体变浑浊。

（3）使用μm孔径的筛网进行过滤，取少量滤液在镜下进行观察，可以看到明显的隐窝状组织结构。

4.类器官操作流程之—离心、加胶。

基质胶计算：第3步后观察收集到的组织体积，添加25倍组织体积的基质胶。

5.类器官操作流程之——铺板

加-μl类器官培养基培养

6.类器官操作流程之——观察

本期推荐

类器官培养基试剂盒

培养简单：培养基集成多种因子，无需添加其他因子和再优化；

扩增效率高：培养的类器官能够快速增长；

维持稳定传代：维持至少3代以上扩增，部分类器官每次传代可实现10代以上扩增；极佳的性价效益比：按照GMP级别生产条件下制备，批次质量稳定，价格优势明显。

基质胶

Absin特色产品线：WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体:二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...